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用于真菌的纸片扩散法药物敏感实验。

【产品名称】
通用名称：改良真菌药敏培养基
英文名称：MHGMB Fungi AST agar medium
【包装规格】
10个/包
【预期用途】
用于真菌的纸片扩散法药物敏感实验。
【储存条件及有效期】
避光，2～8℃，有效期限为110天，具体详见产品包装上所示。对于其琼脂平板，打开内包装后有效期为5天。
【样本要求】
    分离纯化的真菌菌株，选自念珠菌显色培养基上或非选择性马铃薯葡萄糖培养基上孵育20～24 h的纯化菌株，菌落特征典型。
【检验方法】 
1. 试验应严格遵守无菌操作， 防止微生物污染；
2. 接种物制备——直接菌落悬液法
1) 从孵育20～24 h的琼脂平板（应选用念珠菌显色培养基上或非选择性马铃薯葡萄糖培养基）上挑取数个单个菌落，直接在3 mL的生理盐水中制成菌悬液；
2) 调整菌悬液的浊度使其相当于0.5麦氏浓度[（1～2）×108CFU/mL]。肉眼观察，应在足够的光线下，贴靠着有黑白相间粗线条的比色卡与0.5麦氏浓度标准管进行比较。
3. 接种平板
1) 平板的准备：35±2℃孵箱，平板正放，皿盖半开，放置约20～30 min，使其恢复至室温并使琼脂表面冷凝水干掉；
2) 调整好菌悬液的浊度后好在15 min内将无菌棉签浸入菌悬液内。紧贴试管内壁在液体上方旋转拭子数次，除去棉签上多余的液体；
3) 用拭子横划线接种整个表面干燥的琼脂表面；然后再旋转平板约60o，再次用拭子横划线接种；如此两次，亦即从3个方向（60o）用棉签划线接种琼脂表面，以确保每次接种均匀分布，后在琼脂平板的边缘涂抹一圈；
4) 盖子可半开3～5 min，以使琼脂吸收表面多余的水分，在15 min内贴完药敏试验纸片。
4. 纸片在已接种的琼脂平板上的位置
1) 将预先设定的一组抗菌药物纸片分置在已接种细菌的琼脂表面，每个纸片必须压下以确保与琼脂表面完全接触，无论是单独放置的纸片或有纸片分配设备，纸片必须分布均匀，两纸片之间圆心的距离不少于24 ㎜。90 ㎜的平板放置不超过4个纸片。但对于一些药物产生的抑菌环很大，在一个琼脂板内仅放置2～3个纸片。注意纸片距离琼脂边缘的距离同样重要，无论有多少纸片，如果纸片放置得太靠近琼脂的边缘（≥10 ㎜），一些药物的抑菌环可能会不完整，由于一些药物几乎是瞬间扩散的，一旦纸片与琼脂表面接触，就不能再移动，如位置不佳可在琼脂的另一个位置重新放置一个纸片；
2) 在放置好纸片后15 min内倒置琼脂板并将它放置在35±2℃的孵箱中，需氧孵育20～24 h。
5. 平板的判断
1) 经过20～24 h的孵育后，检查每个平板。如果平板的涂布令人满意，接种正确，由此产生的抑制圈是均匀的圆形，并会有融合生长的菌苔。如果可见单个菌落，说明接种量过稀，必须重复试验。测量完全抑制区的直径（由肉眼来判断），包括纸片的直径。测量抑菌环至接近的整毫米数，采用游标卡尺或尺子在培养板的背面测量。将培养基放在一个黑色不反光的背景上并用反射的光照射。
2) 没有肉眼可见的明显的生长区即可认为抑制圈边缘。在抑菌环边缘的只能在放大镜下观察到的微小菌落的生长可以忽略不计。
3) 根据测量的抑菌圈直径对照判读标准进行判断。

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